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        大鼠軟骨細胞的制備方法一起來(lái)了解一下

        更新時(shí)間:2022-04-13點(diǎn)擊次數:1252
               大鼠軟骨細胞是軟骨組織中的主要細胞成分。位于軟骨陷窩中。軟骨細胞的核小,呈圓形或橢圓形,有1至數個(gè)核仁,胞質(zhì)略嗜堿性。細胞形狀依軟骨組織而異:在透明軟骨,靠近軟骨膜的細胞呈橢圓形,其長(cháng)軸與軟骨表面平行,深部的細胞逐漸變?yōu)閳A形或卵圓形,常常兩個(gè)或多個(gè)聚集成群,稱(chēng)為同源細胞群;在彈性軟骨,細胞的形態(tài)基本上與透明軟骨的相似;在纖維軟骨,細胞略呈卵圓形,夾在膠原纖維束之間,單個(gè)存在、成對存在或排列成單行。
          大鼠軟骨細胞制備:
          1)大鼠關(guān)節軟骨細胞的取材、培養及細胞一般生物活性測定
          取4~5周齡,體重185~200g的SD大鼠,斷頸處死,置于5%CO2混和氣體環(huán)境中,37℃恒溫箱內單層培養,隔3d換液,8~10d達85%融合后進(jìn)行傳代。
          2)倒置相差顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀(guān)察
          取每代貼壁軟骨細胞于倒置相差顯微鏡觀(guān)察細胞生長(cháng)情況。倒置相差顯微鏡觀(guān)察:原代軟骨細胞9~12h部分貼壁,大部分在24h時(shí)完成貼壁,部分細胞開(kāi)始伸展,細胞體積較小,呈多角形,均勻散在生長(cháng),48h內基本上鋪展成三角或多角形;7~10d達到90%融合形成單層細胞,細胞仍呈多角形或短梭形,細胞排列緊密,折光性強。
          3)軟骨細胞透射電鏡觀(guān)察胰酶消化各代次軟骨細胞,離心后先于離心管培養3d,送福建醫大電鏡室制片觀(guān)察。經(jīng)離心管培養3d后,固定標本進(jìn)行電鏡技術(shù)觀(guān)察,原代P0培養軟骨細胞為卵圓形或圓形,細胞核清晰,較多異染色質(zhì)分布于核膜邊緣和核內。
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