小鼠肺血管內皮細胞分離自肺組織,肺是機體的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆蓋于心之上。肺有分葉,左二右三,共五葉。肺經(jīng)肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連,故稱(chēng)喉為肺之門(mén)戶(hù),鼻為肺之外竅。
微血管內皮細胞密切參與包括再生、發(fā)育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應。細胞呈梭形或多角形,形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。肺微血管內皮細胞構成半選擇性屏障,該屏障對于肺氣體交換,調節液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動(dòng)具有重要意義。
操作流程
1、小鼠肺血管內皮細胞請按照以下方法進(jìn)行操作:取出25cm2培養瓶,75%酒精擦拭培養瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時(shí)以穩定細胞狀態(tài),然后換用新鮮*培養液繼續培養或進(jìn)行傳代。
2、細胞傳代:
1)細胞生長(cháng)至覆蓋培養瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀(guān)察,待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀細胞用12ml*培養基重懸,然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
4)待細胞*貼壁后,觀(guān)察培養結果,之后進(jìn)行換液培養或傳代。
3、細胞凍存:用適量的凍存液重懸細胞,并放置于凍存管中。