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Product Center當前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心細胞系可傳代細胞K7M2-WT細胞
K7M2-WT細胞(小鼠骨肉瘤成骨細胞)形態(tài):成骨細胞樣,貼壁生長(cháng)含量:>1x106 個(gè)/瓶污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
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應用領(lǐng)域 | 醫療衛生,生物產(chǎn)業(yè) |
一、細胞特性
二、細胞接收后的處理:
1、貼壁細胞
2、懸浮細胞
本公司的細胞培養操作規程,供參考
一、K7M2-WT細胞培養基及培養凍存條件準備:
二、細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
3)細胞凍存:待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí),先要消化處理并進(jìn)行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行,后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心,用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。
注意事項:
1. 收到凍存管細胞后,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
3. 細胞用途:僅供科研使用。
發(fā)貨方式:
復蘇后發(fā)貨:我們復蘇細胞后發(fā)貨,貨期一周左右,免運費。(氣溫較好建議復蘇后發(fā)貨)
凍存發(fā)貨(干冰運輸):需額外增加干冰運費,選擇干冰運輸的我們發(fā)兩管細胞,為了保證客戶(hù)接種可靠性多發(fā)一管。(氣溫低于0℃須凍存發(fā)貨)
細胞發(fā)貨采取專(zhuān)業(yè)的運輸包裝,并選擇快捷的運輸方式(順豐速運或其他空運快遞)
本公司細胞引種來(lái)源:ATCC、DSMZ、ECACC、武大細胞庫、上海生化細胞所、中國科學(xué)院典型培養物保藏委員會(huì )等。
細胞培養常用試劑使用問(wèn)答
1.谷氨酰胺使用方法是什么?
答:谷氨酰胺在溶液中很不穩定,故4℃下放置1周可分解50%,使用中單獨配制,置-20℃冰箱中保存,用前加入培養液中。
2.碳酸氫鈉在室溫條件存放是否穩定?
答:碳酸氫鈉白色粉末,或不透明單斜晶系細微結晶。比重2.159。無(wú)臭、味咸,可溶于水,微溶于乙醇。其水溶液因水解而呈微堿性,受熱易分解,在65℃以上迅速分解,在270℃時(shí)*失去二氧化碳,在干燥空氣中無(wú)變化,在潮濕空氣中緩慢分解。
3.培養細胞生長(cháng)減慢的原因有哪些?其解決辦法有哪些?
答:可能得原因有:更換了不同的培養液或血清;培養液中一些細胞生長(cháng)必需成分如谷氨酰胺或生長(cháng)因子等耗盡或缺乏或已被破壞;培養物中有少量細菌或真菌污染;試劑保存不當;比較新培養液與原培養液成分,比較新血清與舊血清支持細胞生長(cháng)實(shí)驗找出可能的原因。
解決辦法:增加起始培養細胞濃度;讓細胞逐漸適應新培養液;換入新鮮配制培養液;補加谷氨酰胺或生長(cháng)因子等;用無(wú)抗生素培養液培養,如發(fā)現污染,丟棄培養物,或用抗生素除菌;血清需保存在-5℃到-20℃;培養液需在2-8℃避光保存;含血清*培養液在2-8℃保存,并在2 周內用完;分離培養物,檢測支原體。
4.L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?
答:L-谷氨酰胺在細胞培養時(shí)非常重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì )降解,降解率隨保存溫度而變。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。
5.細胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度越高越好嗎?
答:不見(jiàn)得!因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下,pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力*。另外,鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進(jìn)行傳代消化前,一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶,以便于將含血清的培養基沖洗干凈,這樣就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液濃度為:
(1)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA;
(2)0.25% 胰蛋白酶
多數細胞傳代消化可使用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA這種消化液。
6.二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎?使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的是什么?
答:二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,用EDTA清洗細胞,以消除來(lái)自培養基中所有的二價(jià)離子。