小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞是一種除造血干細胞以外的、具有多向分化潛能的干細胞,可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化,因此可以作為組織工程中的種子細胞,在適當的條件下,骨髓間充質(zhì)干細胞可以分化為三個(gè)胚層來(lái)源的組織細胞而進(jìn)行細胞移植的治療,在體外培養擴增后也可種植在生物材料上,回植入機體修復組織損傷。
充質(zhì)干細胞在治療組織器官退行性疾病,遺傳缺陷性疾病和基因治療方面也展現了美好的前景,本產(chǎn)品具有良好的增殖和分化潛能,可分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等,采用干冰保存運輸。收到細胞時(shí),若干冰已經(jīng)*融化,請立即將細胞復蘇培養;若尚留有干冰,請立即將細胞放入液氮中保存待用,請按條件貯存細胞,切不可將細胞置于高溫環(huán)境。
方法步驟:
1、沿著(zhù)脊髓切開(kāi),從身體的軀干解剖后肢,小心不要損傷股骨;
2、進(jìn)一步解剖后肢,通過(guò)切開(kāi)膝關(guān)節來(lái)切開(kāi)每個(gè)后肢;從脛骨和股骨中去除肌肉和結締組織;將骨干刮干凈;
3、超凈臺操作,切斷骨髓腔末端下方的脛骨和股骨的末端;將裝有完整培養基的10 ml注射器上的27號針頭插入通過(guò)移除生長(cháng)板暴露的海綿狀骨中,用1ml*培養基將骨髓塞從骨頭切開(kāi)的末端沖洗出來(lái),收集在冰上的10ml管中。
4、小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞通過(guò)70mm過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾細胞懸液,以去除任何骨針或肌肉和細胞團塊; 通過(guò)臺盼藍排除法測定細胞的產(chǎn)量和活力,并在血細胞計數器上計數。
5、在95mm培養皿中培養BM細胞,在1ml*培養基中,密度為25×106個(gè)/mL細胞(基于步驟4中獲得的細胞計數);3h后更換新的*培養基。
6、再培養8小時(shí)后,用1.5ml新鮮的*培養基替換培養基;此后,每8小時(shí)重復該步驟,直至72小時(shí)的初始培養。