小鼠心肌細胞的凍存方法和常見(jiàn)問(wèn)題解決辦法介紹

　　小鼠心肌細胞已廣泛用于成熟心肌細胞離子通道、蛋白免疫化學(xué)、心肌病及心肌梗塞等模型的實(shí)驗研究中，不僅在結構和功能上更接近在體細胞，并且成熟心肌細胞的體外培養模型可以排除成纖維細胞對實(shí)驗結果的干擾。

　　心臟由心肌細胞和間質(zhì)細胞組成，心肌細胞占心臟總體積的75%，但細胞數僅占心臟細胞總數的1/3，出生后心肌細胞喪失增值能力，是高度分化的終末細胞，主司收縮功能。間質(zhì)細胞由成纖維細胞、血管平滑肌細胞、神經(jīng)細胞及巨噬細胞等組成，成纖維細胞占間質(zhì)細胞90%以上，成纖維細胞具有分泌功能，合成和分泌生物活性物質(zhì)，調節自身膠原的產(chǎn)生及周?chē)募〖毎男螒B(tài)結構和生理功能。

　　心肌細胞按生理功能分為兩類(lèi)：一類(lèi)為工作細胞，包括心房肌及心室肌，胞漿內含有大量肌原纖維，因而具有收縮功能，主要起機械收縮作用。除此以外，還具有興奮性、傳導性而無(wú)自律性。另一類(lèi)為特殊分化的心肌細胞，包括分布在竇房結、房間束與結間束、房室交界、房室束和普肯耶纖維中的一些特殊分化的心肌細胞，胞漿中沒(méi)有或很少有肌原纖維，因而無(wú)收縮功能，主要具有自律性，有自動(dòng)產(chǎn)生節律的能力，同時(shí)具有興奮性、傳導性。

　　一、小鼠心肌細胞凍存方法

　　1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；

　　2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；

　　3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜；

　　二、常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

　　1、培養瓶有破裂，培養液有漏液：可能會(huì )污染，所以我們會(huì )及時(shí)解決。

　　2、細胞漂?。号囵B瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀(guān)察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留10ml培養液培養觀(guān)察，細胞生長(cháng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養。