小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分離方法有全骨髓法和密度梯度離心法,全骨髓法即根據干細胞貼壁特性,定期換液除去不貼壁細胞,從而達到純化MSC的目的。密度梯度離心法即根據骨髓中細胞成分比重的不同,提取單核細胞進(jìn)行貼壁培養。
分離培養結果的差異可能是由于各個(gè)研究小組標本來(lái)源、采用的分離方法不同從而所獲得的細胞不同,或者用來(lái)檢測的細胞代數不同,或者培養過(guò)程中用的胎牛血清不同,導致MSCs獲得或失去這些表面標記物的表達。
小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的培養一定要用塑料培養瓶,不能用玻璃的。因為象間質(zhì)干這類(lèi)的基質(zhì)細胞不易貼玻璃,而且現在買(mǎi)的培養瓶都涂有一層促細胞貼壁的物質(zhì),而且隨著(zhù)細胞的擴增,端粒的長(cháng)度不變,單個(gè)MAPC來(lái)源的細胞群不僅能在體外向3個(gè)胚層的細胞分化,而且能在體內能夠向各種組織細胞分化,相比較而言,形態(tài)與MSC相似的體外培養的皮膚成纖維細胞則不具有類(lèi)似的分化潛能。
原代分離的間充質(zhì)干細胞在接種后培養24小時(shí),細胞開(kāi)始貼壁,胞體呈圓形或多邊形,培養第3-5天,細胞開(kāi)始較緊密貼附壁上并開(kāi)始有細胞呈梭形,并不斷長(cháng)大、變長(cháng),但未觀(guān)察到細胞分裂,隨著(zhù)細胞數的增加,細胞的生長(cháng)速度變快,逐漸成漩渦狀排列,培養第12天貼壁細胞長(cháng)滿(mǎn)瓶底的80%,并融合成片。采用貼壁培養法可獲得足夠數量、生長(cháng)狀態(tài)良好、增殖能力強的間充質(zhì)干細胞,隨傳代數增加,其純度增加,且該方法簡(jiǎn)單、實(shí)用。